2025年溆浦鹅、朗德鹅及杂交鹅的肥肝特性研究项目实施方案

鹅肥肝质地细嫩，含有大量对人体有益的不饱和脂肪酸和多种维生素，营养价值高，口味鲜美，是世界公认的美食。研究表明，溆浦鹅填饲4周后，平均肥肝重达600.3 g，比未填饲鹅普遍增重6～10倍，是国内肥肝性能最佳的优良地方鹅种。但由于溆浦鹅缺乏科学系统的肥肝性状选育，导致产肝性能个体差异大，肥肝变异系数大、均一度低等缺点，严重影响了溆浦鹅肥肝生产效率、产品品质和经济效益。为探究溆浦鹅及其杂交鹅肥肝特性，给溆浦鹅肥肝性状选育及杂交利用提供科学合理的理论依据，制定本实施方案。

一、项目概况

溆浦县种畜场在观音阁镇覃村，建立溆浦鹅保种备份场，实施溆浦鹅、朗德鹅及杂交鹅的肥肝特性研究项目，研发配套溆浦鹅填饲技术，筛选杂交优组合。对鹅品种群体扩繁，试验鹅320只。

二、项目资金来源

项目预算总投资67万元，其中中央财政衔接乡村振兴资金52万元（溆农联﹝2025﹞13号文件）。

三、预期目标

1、研发配套溆浦鹅填饲技术，筛选杂交优组合。

2、联农带农目标。经项目实施，达1个脱贫村、7个脱贫户及监测户、22个脱贫人口数及防止返贫监测对象受益。通过就业务工、带动生产等利益联结机制，确保脱贫户、监测户收入持续增长，进一步巩固脱贫攻坚成果。

四、建设内容

（一）材料与方法

1、试验动物和试验设计

选取同批孵化并在相同饲养管理条件下饲养90日龄健康的溆浦鹅、朗德鹅、溆浦鹅（♂）×朗德鹅（♀）（体重4.5kg左右）240只（公/母），按品种和性别分成A、B、C、D、E、F 共6个组，每组8个重复，采取笼养的方式，每个笼为1个重复，每个重复5只，预饲5d，填饲21d。记录试验鹅开始填饲前和填饲结束后体重，根据消化情况控制每只鹅的填饲量基本相同，分组情况如下表：

 

2、试验饲粮和填饲方案

填饲试验日粮由98%玉米、1%植物油、0.5%食盐和0.5%复合维生素、复合抗应激制剂等制成颗粒状饲料组成。填饲前1：1兑水搅拌为稀粉状料。填饲方法参考王宝维等（2014）研究内容，即第1-3天，每只鹅每天填饲2-3次，每次填饲200-250g；第4-6天，每只鹅每天填饲3-4次，每次填饲250-350g；第7-15天，每只鹅每天填饲4-5 次，每次填饲350-450g；第16-21天，每只鹅每天填饲4-6次，每次填饲450-550g。

（二）饲养管理

1、预饲期的饲养管理

在预期前对圈舍、填饲机、饮水槽和料槽等进行熏蒸消毒。在预饲期做好试验鹅的疫苗接种和驱虫等工作。预饲期饲喂成年料及少量青饲料，自由采食和饮水，使试验鹅逐渐从以青料为主转变为以精料为主。在管理上保持圈舍清洁干燥，通风良好，控制光线亮度并保持环境安静，为填饲期的管理打下良好基础。

2、填饲期的饲养管理

填饲期间，由专业人员使用定制的填饲机进行填饲。保证试验鹅自由饮水，鹅舍温度为24～26 ℃，相对湿度为 45%～65%，环境安静，圈舍隔天消毒1次。在整个填饲过程中，注意观察试验鹅的健康状况，限制鹅运动，以减少能量消耗。

（三）样品采集与处理

1.填肥性能数据

填饲前，测定每只鹅的体重，记录为初始体重；填饲期间，记录每天每只鹅每顿的填饲量；填饲结束后，称量每只鹅的重量，记录为填肥末重。计算体增重率、肝体比和料肝比等。

2.血液样品采集

在填饲21d ，禁食12h后空腹称重，进行翅静脉采血样15mL于离心管中，在室温下倾斜静置2h，待血清析出后，于4℃ 3 000r/min离心15min，吸取上层血清于离心管中，置于-20℃冰箱保存，用于血液相关指标测定。试验鹅取血样后割断颈静脉放尽血。

3.肝脏样品

屠宰后测定肝重和腹脂重，计算肝体比(肝脏重/体重) 等指标。采集肝脏组织(长度×宽度×高度=1.0×1.0×1.0 cm)两份于4%多聚甲醛溶液中，用于后续苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)；从每副肝的右叶取15g肝样置-80℃保存用于肥肝中常规营养指标测定，采集鹅右侧肝脏组织约50g于锡纸中置于-80℃冰箱保存，用于肝脏脂肪酸、氨基酸的测定；取剩余肝样100g于锡纸中置于-80℃冰箱保存，用于风味物质测定。

4.屠体取样

肝脏取出后将心脏、肌胃、肠道、脾、胰、气管、食管、食道膨大部、肌胃、腹脂（包括腹部板油及肌胃周围的脂肪）和生殖器官取出，剥离腹部脂肪和肌胃周围脂肪，为腹脂重；用游标卡尺测量皮下脂厚和肌间脂肪宽度。

4.1肠道组织形态指标

分别取其十二指肠、空肠及回肠中段2cm，用4%多聚甲醛固定。

4.2肠道内容物

在十二指肠、空肠、回肠、盲肠中间部位各取内容物1g于2mL冻存管中，迅速于液氮冻存，-80℃冰箱保存，用于测定肠道菌群结构。

4.3肠道黏膜样

分别于十二指肠、空肠、回肠中段靠后1cm处各取0.5g左右黏膜，置于1.5ml的离心管中，-80℃冷冻保存待用。

（四）测定指标

1.生长性能

在预饲期和填饲期末个体空腹称重，统计各组的饲料消耗量，计算初重、末重、体增重、料重比。

1）体增重=始重-末重；

2）料重=饲养期间的耗料总量；

3）体增重率=（末重-初重）/初重；

4）料重比=全期耗料量/全期体增重；

5）平均日采食量=（喂料总量-下一次喂料前收集的总剩料）/试验天数；

6）平均日增重=总增重/（试验天数/试验只数）；

7）填饲存活率=经过填饲期后存活的数量÷填饲前的数量×100%。

2.屠宰性能

活重（g）：指在屠宰前禁食6h后的空腹体重；

屠体重（g）：经放血，去除羽毛、脚角质层、趾壳和喙壳后的重量。（湿拔法须沥干）；

全净膛重（g）：屠体去除气管、嗉囊、肠、脾、胰、胆和生殖器官、胃内容物和角质膜后的重量，再减去心、肝、腺胃、肌胃、肺和腹脂的重量，保留头、脚；

腹脂重（g）：腹部和肌胃周围剥离的脂肪重；

肌间脂肪宽（cm）：用游标卡尺测定大腿切离处内侧胸肌侧突部位肌间的脂肪带宽，取平均值；

皮脂厚（cm）：尾椎前端、背正中线切开的皮肤转角处（包括皮肤）皮下脂肪层厚度。用游标卡尺测量两侧皮下脂肪厚度取其平均值。

1）屠宰率（%）＝屠体重/活重×100%；

2）腹脂率（%）＝腹脂重/（全净膛重+腹脂重）×100%；

3）皮脂率（%）＝（腹脂重+皮重+皮下脂肪重）/（全净膛重+腹脂重）×100%。

3.肥肝生产性能

4.肥肝生长性能

1）肥肝重（g）：试验鹅屠宰后称取的肥肝鲜重；

2）肝体比（%）=个体肥肝重/个体活重×100%；

3）料肝比（%）=平均耗料量/平均肥肝重×100%；

4）肝屠比=个体肥肝重/个体屠体重×100%；

5.肥肝营养成分

1）水分：105℃恒温烘干失水法；

2）粗灰分：灼烧质量法（GB 5009.4-2016)；

3）粗蛋白：凯氏定氮法(GB/T 6433-2006)；

4）粗脂肪：索氏提取法(GB 5009.5-2016 )。

5）胆固醇：肝脏胆固醇含量测定所用试剂盒与血清相同，但在样品处理上有所不同。肝组织样品处理：称取肝脏组织重量，按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍的匀浆介质，本试验中加入了PBS作为匀浆介质，在冰水浴条件下进行机械匀浆，匀浆后以2500rpm，离心10min，取上清液，部分上清液用于检测总蛋白浓度。按血液胆固醇测定方法检测肝组织胆固醇含量后还需检测总蛋白浓度。

6.肥肝理化指标

6.1肥肝抗氧化性能

肝脏抗氧化指标测定：取适量10%肝脏组织的上清匀浆液，使用化学试剂盒测定鹅肥肝内谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性及总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量。

6.2肥肝组织切片

将所取肝样送检，制作石蜡切片和冷冻切片，最后进行显微镜镜检，图像采集分析。

6.3肥肝酶活性指标

肝脏样品在4℃下解冻，在冰水浴中剪碎，按1:9的质量体积比加入预冷的生理盐水，然后匀浆，匀浆液经4000r/min离心10 min，取上清液。采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定血清和肝脏中胆碱酯酶(cholinesterase,CHE)、脂肪酶(lipase,LPS)、脂蛋白脂肪酶 (lipoprteinlipase,LPL)、肝脂酶(hepaticlipase,HL)活性以及非酯化游离脂肪酸(nonesterified free fatty acids,NEFA)含量。总脂酶(Total lipase,TLP) 计算方法：TLP=LPL+HL。组织匀浆的总蛋白根据南京建成生物工程研究所生产的总蛋白定量试剂盒(BCA法) 测定。各指标具体操作方法参照试剂盒说明书。

7.肥肝风味物质

7.1前体风味物质

1）氨基酸

2）脂肪酸

3）嘌呤类

7.2挥发性风味物质

8.血清生理生化指标

9.肠道指标

9.1肠道形态指标

9.2肠道菌群样

在十二指肠、空肠、回肠、盲肠中间部位各取内容物1g于2mL冻存管（灭菌冻存管）中，迅速于液氮冻存，-80℃冰箱保存，用于测定肠道菌群结构。

10.分子育种指标

根据以上指标检测情况，开展部分有针对性的分子采样与分子标记验证的研究工作，为后续新品种培育奠定基础。

10.1极端表型筛选样本采集

（1）表型关联组织样本

极端表型个体：选择肥肝重量前/后10%、生长速度快/慢、饲料转化率高/低的个体。

采样类型：

肝脏（极端肥肝组vs正常组）：对比脂质沉积差异。

肌肉组织（胸肌、腿肌）：用于生长相关基因（如IGF-1、MyoD）分析。

脂肪组织（皮下、腹脂）：检测脂肪细胞分化相关指标。

（2）生理指标监测样本

体重、体尺测量：定期记录（如每周），关联基因型与生长表型。

填肥应激指标：采集唾液或血液中的皮质醇（应激激素），评估填肥适应性。

10.2多组学采样（基因组、转录组、蛋白组、代谢组）

（1）基因组学样本

DNA来源：血液（EDTA 抗凝，-20℃保存）、羽毛（带毛囊）、脚趾皮组织。

检测目标：全基因组重测序、SNP 分子标记筛选、遗传连锁分析。

（2）转录组学样本

RNA来源组织：肝脏（核心组织）、脂肪组织、下丘脑（调控摄食）、胰腺（胰岛素分泌）。

采样要求：液氮速冻，-80℃保存，用于mRNA/miRNA测序，分析基因表达调控网络。

（3）蛋白质组学与代谢组学样本

蛋白质组：肝脏、血清，提取蛋白后进行质谱分析（如差异表达蛋白筛选）。

代谢组：肝脏组织提取物（极性 / 非极性代谢物）：检测脂肪酸、氨基酸等。

血清/血浆：分析小分子代谢物（如丙酮、游离脂肪酸），关联肥肝形成通路。

10.3分子标记与基因组重测序样本

（1）高质量 DNA 样本

采样要求：采集200-300μL抗凝血（EDTA），或50mg组织（如肝脏、肌肉）。

DNA浓度≥50ng/μL，纯度OD260/280=1.8-2.0，用于全基因组重测序（WGS）、简化基因组测序（RAD-seq）。

（2）群体样本采集

家系样本：核心育种群（父本、母本及 F1 代），用于连锁分析和QTL定位。

自然群体：不同品种鹅（如朗德鹅、狮头鹅），用于群体遗传学分析。

10.4表型验证辅助样本

（1）环境与饲养记录

填肥方案（饲料量、填饲频率）、饲养环境温度/湿度，用于表型-环境关联分析。

（2）细胞样本（可选）

原代肝细胞、前脂肪细胞（体外培养）：用于脂质代谢通路验证（如基因敲除/过表达实验）。

（五）数据统计与分析

试验数据用Excel 2019软件进行初步分析后，用SPSS 27.0进行方差分析并用Duncan氏法进行多重比较。试验结果以平均值±标准差表示，用P<0.01表示差异极显著，P<0.05表示差异显著，0.05≤P<0.10表示有提高或降低的趋势，肩标小写字母表示差异显著，肩标大写字母表示差异极显著。

（六）投资概算

见下表。